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                  紫外分光度法進行蛋白定量的實驗方法

                   更新時間:2022-07-19 點擊量:1122
                  紫外分光度法進行蛋白定量的實驗方法
                  蛋白定量是蛋白質檢測過程中的重要環節,檢測的方法有很多,有Bradford檢測法、Bradford斑點試驗法、Coomassie 斑點試驗法、紫外分光度檢測法。其中、紫外分光度法是蛋白質定量方法中比較快的一種方法。

                  一、紫外分光光度法進行蛋白定量的檢測原理:

                  由于蛋白質分子對于不同光度波段的吸光率也有所不同,所以紫外分光度檢測法主要通過光系統來檢測蛋白分子的吸光率,從而確定蛋白質的濃度進行的蛋白定量。比如205nm的光波波長主要吸光為肽鏈分子。280nm波長下色氨酸與酪氨酸吸光率則這兩種分子以為主。
                   
                  二、蛋白定量中蛋白質溶液濃度的確定
                  1、純蛋白質溶液:
                  a.在濾光波長為280nm的環境下對比其吸光率。
                  b.其中的抗體和BSA,估算公式為:蛋白質 A280 (1mg/ml)IgG =1.35; IgM=1.2; BSA=0.7。(單位/吸光率約等于1mg/ml) 

                  2、蛋白定量中核苷酸類的蛋白溶液濃度測定: 
                  a.在280nm和260nm或205nm光波長環境下對照其吸光率;
                  b.蛋白質濃度估算公式:
                  280nm波長:蛋白質濃度(mg/ml)=(1.55×A280 )-(0.76×A260 )
                  208nm波長:蛋白質濃度(mg/ml)= A205 /(27 + 120 A280/ A205 )

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